肌营养不良（DMD/BMD）基因治疗方向及试验现状(2)

　　1、只能针对特定基因缺陷类型治疗，对病人选择严格；

　　2、寡核苷酸链进入细胞膜能力有限，效率较低，特别是全身治疗，如何更好地进入目标组织等问题仍有待解决；3、寡核苷酸链仍可能有免疫原性。

　　三、 克服无义突变，跳过异常中止子。

　　约5%-15%DMD患者的分子发病机制是DMD基因发生无义突变，产生错误终止子，从而导致蛋白翻译提前终止，生成不完整，无功能的Dystrophin。Sweeney教授的研究小组发现氨基甙类抗生素――庆大霉素能够在Dystrophin翻译过程中降低核糖体识别出非正常终止子（Premature Termination Codons，PTCs）的能力，从而跳过这些异常终止子，继续翻译。更为重要的是，这一结果不仅在体外实验中被证实，还在mdx小鼠（外显子23包含无义突变）动物模型中取得明显疗效，发现了重新生成的具备功能的Dystrophin出现在横纹肌细胞膜下。这也是第一次证实化学药物能够在遗传性疾病动物模型中取得疗效[20]。以此为基础，在对DMD患者的临床试验中，基因缺陷类型属于无义突变的患者也取得了相似的结果，证实在人体同样有效。[21]但庆大霉素的应用也存在局限性。一方面，庆大霉素跳过无义突变的效能较低；另一方面，长期大量应用庆大霉素存在较大的毒副作用。所以科研人员对多达 800,000化合物进行了筛选，以期选择出一种效能更强，副作用更小的治疗药物，最终选择出一种名为PTC124的有机化合物（3-[5-（2- fluorophenyl）-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-benzoic acid; C15H9FN2O3）。在DMD患者肌细胞和mdx小鼠肌细胞体外实验中，PTC124可将dystrophin的表达水平分别抬高至正常对照的 40%-60%和35%的水平，而对mdx小鼠药物治疗2-8周后，肌肉切片病理显示dystrophin的表达水平约为野生型小鼠的20%-25%，已基本达到公认的恢复肌肉功能所需的表达水平。这与动物实验中治疗组小鼠对收缩动作耐受性增强及肌酶下降的结果相吻合。[22]在人体临床试验方面，在健康志愿者中，口服PTC124吸收良好，无明显不良反应。[30,31] 在DMD患者中进行的IIa期临床试验已经完成，共对38名5-17岁患儿分为高、中、低三个剂量组，给予28天口服PTC124治疗，无明显不良反应，部分病人在复查的肌肉活检标本中见到Dystrophin表达增多，肌酶明显下降，但未观察到肌肉力量变化。[32]此外，在另一种常见常染色体隐性遗传疾病――囊性纤维化（Cystic Fibrosis，约10%因无义突变所致）中也已完成I期、II期临床试验，证明PTC124口服吸收好，无明显不良反应，耐受性良好，并可在人体发挥生物学效应。[23]这一治疗的优点在于化学药物，口服给药，治疗方便。缺点则是