治疗小儿原发型肺结核的常规方法(6)

　　4、结核杆菌结构成分测定

　　应用气相色谱-质谱分析的方法，检测血清，脑脊液中结核杆菌的菌体结构成分，即结核硬脂酸（10-甲基十八烷酸），具有较高的特异性及敏感性，应用频率脉冲电子捕获气相色谱法测定脑脊液中结核杆菌的羧酸，敏感性95％，特异性91％，但所需设备及技术复杂，昂贵。

　　5、分子生物学检查

　　（1）DNA探针分子杂交：DNA探针方法检测临床标本的敏感性不高，标本中细菌数1万/ml时才呈阳性，用吖啶酯 （acridiniumester）标记的基因探针技术及化学发光测定系统取代酶标显色系统，可提高敏感性，能鉴定多种分枝杆菌，快速检测结核杆菌，应用细菌荧光酶检测杂交信号，可提高敏感性100倍。

　　（2）聚合酶链式反应（PCR）：选择性地扩增对结核杆菌复合物有特异性的MPB64蛋白质的编码基因片段，能将此极微量的DNA样品放大几十万倍以上，数小时可得结果，快速，敏感，特异性强，但较易产生假阳性和假阴性结果，应用PCR扩增结核杆菌特异性插入序列IS6110，检测痰标本，阳性率93％，假阳性率2.9％，国内马路应用巢式PCR测定病理标本，痰标本等的结核杆菌DNA，无假阳性，有人应用巢式PCR检测结核病人外周血单个核细胞中结核杆菌的特异性重复插入序列IS6110，阳性率64％，高于痰涂片的32％与痰培养的35％。

　　（3）DNA指纹技术：分析细菌染色体的限制性内切酶酶切片段的特异性带谱如DNA插入序列IS6110，以鉴定菌株，用于流行病学研究。

　　（4）结核杆菌耐药基因检测：应用PCR-单链构象多态性（PCR-SSCP）分析，PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析，PCR-DNA序列测定，研究结核杆菌耐药基因。

　　（5）基因芯片（genechip）技术：将许多DNA探针以一定顺序及排列方式固定于固相载体上，构成探针矩阵，与待测DNA杂交，可同时获得大量基因信息，1999年美国研制了测定分枝杆菌种间多态性的16SrRNA基因芯片，用于鉴定结核杆菌与其他非结核分枝杆菌，另一种为分析耐药结核菌株rpoB基因型的基因芯片，用于分析rpoB基因突变。